2020年6月19日，激光共聚焦新品STELLARIS上市（上海站）暨華東區(qū)用戶交流會(huì)在中國(guó)科學(xué)院上海學(xué)術(shù)交流中心隆重召開。在眾多方法學(xué)并存的今天，以影像科學(xué)為基礎(chǔ)的科學(xué)研究迸發(fā)出蓬勃生機(jī)。本次會(huì)議圍繞顯微技術(shù)在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、植物學(xué)等多學(xué)科中的應(yīng)用成果展開討論，并實(shí)操體驗(yàn)STELLARIS和THUNDER系列產(chǎn)品在諸多研究領(lǐng)域的應(yīng)用。

開幕式上，生命科學(xué)市場(chǎng)經(jīng)理李偉晶對(duì)各位專家的蒞臨表示了歡迎，回顧歷史，徠卡始終秉持以前沿科技為導(dǎo)向，實(shí)現(xiàn)應(yīng)用轉(zhuǎn)化，以助力用戶推動(dòng)科學(xué)發(fā)展。應(yīng)用團(tuán)隊(duì)為STELLARIS揭開神秘面紗，向與會(huì)的專家們介紹了產(chǎn)品的性能與應(yīng)用，并通過分組操作的方式讓專家們親身感受革命性升級(jí)帶來的全新體驗(yàn)。

▲應(yīng)用團(tuán)隊(duì)為STELLARIS揭幕

▲與會(huì)人員上機(jī)感受STELLARIS

會(huì)上諸多徠卡的資深用戶分享了自己的研究成果與心得體會(huì)，我們一起來回顧下吧。

講題一：血腦屏障胞轉(zhuǎn)機(jī)制管狀結(jié)構(gòu)的超分辨研究

報(bào)告人：田肖和 安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院

田教授介紹了課題組通過熒光納米探針揭示血腦屏障胞轉(zhuǎn)機(jī)制。從納米顆粒的制備到表面修飾分子Angiopep2濃度的優(yōu)化，從生物物理學(xué)模型分析到“三明治樣”3D細(xì)胞模型的設(shè)計(jì)，每一個(gè)環(huán)節(jié)都建立在穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)基礎(chǔ)上。研究人員發(fā)現(xiàn)大分子透過血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)受到受體濃度的調(diào)節(jié)，且需Syndepin II的協(xié)助才能高效完成。田教授利用Leica共聚焦的共振掃描技術(shù)初步驗(yàn)證了這一假說，利用4D STED技術(shù)進(jìn)一步捕捉到分子通過血腦屏障的實(shí)時(shí)超分辨影像學(xué)信息，并分享了他在STED熒光染料優(yōu)化環(huán)節(jié)上的寶貴經(jīng)驗(yàn)，向我們展示了高水平的神經(jīng)生物學(xué)和納米示蹤技術(shù)的超分辨研究。

▲田教授分享其在STED熒光染料優(yōu)化環(huán)節(jié)上的寶貴經(jīng)驗(yàn)

講題二：體外細(xì)胞微環(huán)境重構(gòu)及生物學(xué)行為研究

報(bào)告人：劉妍君 復(fù)旦大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究院

劉教授課題組結(jié)合微流控技術(shù)及分析化學(xué)的方法，重構(gòu)體內(nèi)細(xì)胞微環(huán)境，研究細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、遷移等生命現(xiàn)象。通過與Leica合作共同搭建的全自動(dòng)活細(xì)胞動(dòng)態(tài)跟蹤影像平臺(tái)，實(shí)驗(yàn)者可輕松追蹤長(zhǎng)達(dá)數(shù)天的活細(xì)胞行為，并能保證長(zhǎng)時(shí)間成像過程中焦面的穩(wěn)定及細(xì)胞的活性。研究者發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在體外重構(gòu)的不同微環(huán)境中可在EMT與Amoeba運(yùn)動(dòng)間靈活切換，這為體內(nèi)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移及侵襲機(jī)制的研究提供了新思路，有望為腫瘤精準(zhǔn)治療提供新方向。

▲劉教授分享其實(shí)驗(yàn)平臺(tái)

講題三：FLIM在無標(biāo)記癌癥診斷和納米材料中的應(yīng)用

報(bào)告人：糜蘭 復(fù)旦大學(xué)光科學(xué)與工程系

FLIM技術(shù)具有對(duì)微環(huán)境的PH值、蛋白結(jié)合態(tài)、氧、鈣離子濃度等敏感，不受樣品濃度、激發(fā)光強(qiáng)度、光漂白等的影響等特點(diǎn)。研究人員發(fā)現(xiàn)由于代謝的不同，癌變區(qū)域的自發(fā)熒光壽命比較短。在常規(guī)腫瘤病理診斷中組織化學(xué)石蠟切片需要7天，冰凍切片HE染色需要30min，而FLIM方法只需要2~3min。在對(duì)肺癌與宮頸癌患者的樣本分析中發(fā)現(xiàn)，熒光壽命的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且能在組織發(fā)生可觀測(cè)形變前對(duì)腫瘤進(jìn)行早期診斷。

▲FLIM成像下，腫瘤組織的自發(fā)熒光壽命短于正常組織，正常組織、移行區(qū)和癌變區(qū)的邊界明顯

此外，FLIM還可用于細(xì)胞內(nèi)PH探測(cè)。細(xì)胞內(nèi)pH對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡、離子轉(zhuǎn)運(yùn)、內(nèi)吞、腫瘤生長(zhǎng)等至關(guān)重要，異常的pH與腫瘤、阿爾茨海默癥等相關(guān)。pH傳感CDs納米粒子，在不同PH值溶液中，不僅熒光亮度變化，熒光壽命也會(huì)變化，而且更加線性，更加穩(wěn)定。能應(yīng)用在活細(xì)胞中，與其他熒光染料共染。

▲CDs在活細(xì)胞中的FLIM成像

講題四：FLIM-FRET技術(shù)驗(yàn)證植物自噬相關(guān)蛋白互作

報(bào)告人：管彬 中科院分子植物創(chuàng)新中心

煙草表皮細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá)細(xì)胞自噬相關(guān)膜蛋白X-GFP和Y-mCherry，研究人員利用門控技術(shù)有效去除煙草細(xì)胞壁的自發(fā)熒光和雜散光。在只表達(dá)X-GFP和表達(dá)free-GFP/Y-mCherry的對(duì)照組中測(cè)得Donor GFP的的熒光壽命為2.75ns左右，而在同時(shí)表達(dá)X-GFP和Y-mCherry的實(shí)驗(yàn)組中測(cè)得GFP的熒光壽命下降至2.6ns左右，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示X蛋白與Y蛋白有顯著的FRET現(xiàn)象。

講題五：多功能熒光聚合物納米探針用于淋巴管系統(tǒng)結(jié)構(gòu)與功能的多尺度多模態(tài)成像

報(bào)告人：熊麗琴 上海交通大學(xué)

淋巴管與腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移息息相關(guān)，但目前對(duì)其生理過程研究較少。熊教授構(gòu)建了性能穩(wěn)定、更快速的淋巴管靶向顯影及載藥的多功能納米探針，標(biāo)記小鼠淋巴系統(tǒng)，再利用Leica多光子、高分辨、大深度成像系統(tǒng)觀察，發(fā)展了淋巴管系統(tǒng)活體高分辨成像的新方法。該方法實(shí)現(xiàn)了術(shù)中快速成像，準(zhǔn)確定位，區(qū)別正常淋巴結(jié)與腫瘤浸潤(rùn)淋巴結(jié)的位置，幫助醫(yī)生精準(zhǔn)手術(shù)切除，而無需淋巴結(jié)清掃，減少手術(shù)并發(fā)癥，提高患者生活質(zhì)量。

▲熊老師為大家?guī)砭蕡?bào)告

講題六：STED揭示了纖毛中央微管的形成機(jī)制

報(bào)告人：劉浩 中國(guó)科學(xué)院分子細(xì)胞科學(xué)創(chuàng)新中心

纖毛的運(yùn)動(dòng)對(duì)很多器官正常生理功能起重要作用，而中央微管是纖毛運(yùn)動(dòng)的重要組成部分。研究發(fā)現(xiàn)Wdr47蛋白表達(dá)會(huì)隨著纖毛生長(zhǎng)而遞增，同時(shí)Wdr47蛋白會(huì)在肺和腦等多纖毛組織器官中高表達(dá)。為了研究Wdr47蛋白在纖毛中扮演的角色，使用Leica STED超高分辨成像技術(shù)觀察Wdr47蛋白在纖毛中的定位。結(jié)果顯示，STED技術(shù)可以有效分辨Wdr47在微管上的定位情況，同時(shí)，Wdr47與中央微管有很好的共定位。

此次會(huì)議內(nèi)容精彩紛呈，氣氛熱烈活潑，與會(huì)人員收獲滿滿，一天的會(huì)議時(shí)長(zhǎng)尤嫌不足。期待疫情早日結(jié)束，下一站的會(huì)議可以與更多老師相聚，為大家?guī)砀嗟那把胤窒怼?/span>